细胞传代

细胞密度达到80%~90%时．去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25�TA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加人1ml DMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。

加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。再加入10ml PBS（经高压灭菌，保存于40C），吹匀，细胞凋亡检测试剂盒，吸取10微升进行计数，按照1×106/盘接种，在含5%CO2的细胞培养箱继续培养。

iPS存在的风险

1. iPS 与ES细胞基因表达虽很相似，但iPS细胞存在遗传缺陷．

2. iPS细胞的成瘤性，不同体细胞来源的iPS细胞成瘤性有差异．因此，应选择适当的供体细胞或筛选安全型IPS细胞克服IPS细胞临床cure的成瘤性．

3. iPS细胞及其体外诱导分化细胞的异质性．体细胞重编程不充分(partiallyreprogrammed IPSCs)、筛选标准不严紧和iPS细胞携带供体．细胞的表观遗传记忆和iPS 细胞分化不定向都导致细胞异质性，异质性是导致iPS细胞成瘤的潜在因素

4. iPS细胞体外定向分化细胞的功能与行为研究尚少，尤其在细胞cure上，目的细胞是否会在cure靶位或迁移到非靶位点成瘤，或异位形成组织等是亟待阐明的问题．

营养条件

1．培养基细胞培养基包含细胞生长所需的各种营养物质，包括碳水化合物、氨基酸、无机盐、维生素等。针对不同细胞的营养需求，有多种合成培养基可供选择，如EBSS、Eagle、MEM、RPMll640、DMEM等。

2．其他添加成分在各种合成培养基提供基础营养物质之外，还需根据不同细胞和不同的培养目的添加其他成分，如血1清、因子等。

血1清提供的是细胞外基质、生长因子和转铁蛋白等重要物质，常用的是胎牛血1清。要根据不同的细胞和不同的研究目的决定添加血1清的比例。10%～20%的血1清能维持细胞较快的生长增殖速度，称为生长培养液；为维持细胞缓慢生长或不死，添加2%～5%的血1清即可，称为维持培养液。但血1清中也存在有害于细胞生长和繁殖的物质，如补体、免1疫球蛋白和一些生长抑制因子；成分不明确，影响对结果的分析；不同动物、不同批次的血1清活性差别较大，影响培养效果的稳定性。

谷氨酰胺是细胞生长重要的氮源，在细胞生长代谢过程中起重要作用，但由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定容易降解，4℃下放置7天即可分解约50%，故谷氨酰胺需在使用前添加。

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