传统小分子特异性antibody制备技术

为解决小分子这类半抗原物质无法刺激宿主动物产生antibody的特性，小RNA纯化，必须将半抗原回复完全抗原的特性。解决这个问题可以通过将小分子和对宿主动物immune原性很强的物质：如OVA、BSA、KLH等偶联，将其制备成完全抗原，通过immune宿主动物，便能促使宿主动物产生针对小分子的特异性antibody，这类antibody通过抗原特异性的筛选便能获取目的antibody。目前，通过此项技术能解决绝大多数小分子特异性antibody的制备，但是也可能由于小分子的结构特异，偶联物和偶联方式的选取、偶联率的差异以及immune技术有待发展等多方面的因素使其特异性antibody的制备存在困难。

适用于PCR研究的快速提取法：

1 田间剪取植株新鲜叶片5-10mg(约2cm长)左右，新鲜叶片放于1 5ml离心管中，存于冰盒中，根据样品号贴上相应的标签。

2 用剪刀将叶片组织剪细(约0 5cm长)放在点穴式研板中。

3 加入400μlDNA提取缓冲液，用玻棒将叶组织研细，直到液体变成深绿色即可。

4 再加400μlDNA提取缓冲液，混合均匀，转入一新的1 5ml离心管(贴上相应的编号)。

5 加400μl氯1仿，混合均匀后，2400×g离心30s，将上清液转入一支新的1 5ml离心管(贴上相应的编号)。

6 加800μl无水乙醇，混匀，2400×g离心3min。弃上清。

7 70%乙醇冲洗，风干。

8 用50μlTE缓冲液溶解，存于-20℃。

9 取1μl用于PCR分析。

人ELISA试剂盒的原理及优势：

　　1、ELISA是以immune学反应为基础，将抗原、antibody的特异性反应与酶对底物的有效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。

　　2、由于抗原、antibody的反应在一种固相载体──聚苯乙1烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。

　　3、Elisa生物试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在immune学检验的各领域中。

　　4、ELISA检测试剂盒适用于体外定性检测人血1清或血浆中的抗人类HEV病毒Mantibody ELISA检测。

　　5、ELISA的基础是抗原或antibody的固相化及抗原或antibody的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或antibody仍保持其immune学活性，酶标记的抗原或antibody既保留其immune学活性，又保留酶的活性。

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